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说明: 细胞增殖及毒性检测试剂盒(CCK-8),增强型【产品编码】210817/210818 【包装规格】 产品组成210818/500T210818/1000TCCK-8 增强型溶液5ml 10ml 说明书 1份 1份 【产品简介】CellCounting Kit-8(简称CCK-8),是种基于WST-8面广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速、高灵敏度检测的试剂盒。CCK-8试剂中含有WST-8(化学名:2-(2-甲氣基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基茉基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2日-四唑单钠盐)是种类似于WTT的化合物,它在电子耦合试剂1-甲氧基-5-甲基吩臻錯硫酸二甲酯(1-Wethoxy PMS)存在条件下,可以被线粒体内的股氢酶还原为具有高度水溶性的橙黄色甲珊产物Formazan(参考图1),生成的Forazan数量与活细胞的数量成正比。因此可利用这特性直接进行细胞增殖和毒性分析,细胞增殖越多越快,则颜色越深:细胞毒性越大,则颜色越浅。 【操作步骤】、制作标准曲线(测定细胞具体数量)制备细胞悬液:细胞计数。K2.接种到96孔板中:按比例(例如:1/2比例)依次用培养基等比释成个细胞浓度梯度,般要做3-5个细胞浓度梯度,每组3-6个重复孔。每孔100L细胞悬液。3.37℃培养箱中培养:细胞接种后贴大约要培养2-4小时,如果不要贴这步可以省去。4.每孔加入10HLCCK-8增强型溶液:由于每孔加入CCK-8量比较少,有可能因试剂沾在孔壁带来误差,建议在加完试剂后轻轻敲击培养板以帮助混,或者直接配制含10%CCK-8的培养基,以换液的形式加入。注意不要在孔中生成气泡,以免彤响吸光摩的检测5.培养箱内孵育定时间后测定450nm吸光度,制作出条以细胞数量为横坐标(X轴),吸光度为纵坐标(Y轴)的标准曲线。根据此标准曲线可以定出未知品的细胞数量(使用此标准曲线的前提是实验的条件要致,便于确定细胞的接种数量以及加入CCK-8后的培养时间)。便捷程度细胞活性检测1、制备细胞悬液:细胞计数。2.接种到96孔板中:根据合适的铺板细胞数,每孔100HL细胞悬液,可设置3个重复孔3.37℃培养箱中培养:细胞接种后贴壁大约要培养24h小时,如果不要贴壁这步可以省去。也可以根据实验要求的不同,培养相应的时间。4,每孔加入10HL CCK-8增强型溶液由于每孔加入CCK-8量比较少,有可能因试剂沾在孔壁带来误差,建议在加完试剂后轻轻敲击培养板以帮助混。或者直接配制含10%CCK-8的培养基,以换液的形式加入,注意不要在孔中生成气泡,以免影响吸光度的检测。
说明: 二甲基亚砜,英文名称DMSO。常用于溶解试剂。二甲基亚砜(DMSO)是种含硫有机化合物,分子式为(CH3)2SO,常温下为无色无臭的透明液体,是种吸湿性的可燃液体。具有高极性、高沸点、热稳定性好、非质子、与水混溶的特性,能溶于乙醇、丙醇、苯和氯仿等大多数有机物,被誉为“万能溶剂”。 二甲基亚砜(DMSO)不能使用PS、PVC、PC材料的容器,而应该使用LDPE、HDPE、PP材料的容器。DMSO属于非质子极性溶剂,常用于化学反应、pcr反应以及在细胞、组织和器官的保存中用作玻璃化低温冷冻防护剂。DMSO用于细胞冷冻培养基内,可以保护细胞免受冰晶引起的机械性损伤。它也可以用于主培养、亚培养、重组异倍体、杂交瘤等系列细胞株,胚胎干细胞(ESC)和造血干细胞的冷冻保藏。另外常常与BSA或FBS混合使用。