说明: ECL Western Blotting Substrate 【保存条件】 4℃避光保存 12 月 【概述】 超敏发光液用于检测直接或间接标记辣根过氧化物酶 HRP 的抗体及其关联的抗原。 用于 HRP 标记抗体的 Western Blot 和 HRP 标记探针的核酸杂交。由于采用了独特的发光底物 系统，SuperStar ECL 超敏发光液是目前灵敏的商业化荧光 ECL 检测试剂（具有极高灵 敏度和高信噪比）；可在日光灯下进行发光操作；发光迅速，荧光可使 X 光胶片感光达 12 小时以上，特别适用于痕量蛋白或核酸检测；可使用更高的抗体释倍数(1:2000～1:10000)， 极其节省抗体。 【特点】  飞克级灵敏度 - 在硝酸纤维素或 PVDF 膜上检测低至飞克量的目标蛋白量  高信号稳定性 - 孵育印迹在关键的 4 小时时间内提供稳定的信号持续时间，在佳条 件下可产生长达 24 小时的光输出  稳定的试剂 - 8 小时工作溶液稳定性; 在 4℃下 1 年的试剂盒稳定性  更经济的抗体用量： 0.2 至 1.0μg/ mL 抗（从 1 mg / mL 原液中 1：1000 至 1：5000 释） 10 至 50 ng / mL 二级抗体（从 1 mg / mL 原液中 1：20,000 至 1：100,000 释） 【操作方法】 1. 执行常规 SDS-PAGE、转膜和 Western Blot 步骤。注意用 HRP 标记 lgG 或用抗-链 亲和素-生物素-HRP 夹法。2. Western Blot 后次洗膜的同时新鲜配制发光工作液：分别取 A:B=1:1 混合（如要 1ml 发光液则取 500ul ECL A 液和 500ul ECL B 液混合），放入干净容器中混合。建议立即使用 工作液，室温放置数小时后仍可使用但灵敏度略有降低。 3. 用镊子取出膜，搭在滤纸上沥干洗液但勿使膜完全干燥。将膜完全浸入发光工作液 (0.125ml 发光工作液/cm2 膜)中，与发光工作液充分接触。室温孵育 2 分钟，准备立即压片 曝光。孵育时间过长不会增加灵敏度，有时还会导致曝光条带异常。发光过程的本质是酶促 反应，使用过少的发光工作液不利反应进行，也会导致膜上条带曝光不均和明显降低灵敏度。 为达节约目的可将 膜剪小但勿降低发光液用量。 4. 用镊子夹起膜，搭在滤纸上沥干发光工作液。但勿洗去发光液。 5. 打 X 光胶片暗盒，在暗盒内表面铺张面积大于膜的保鲜膜。将 Western Blot 膜贴在 保鲜膜上，将保鲜膜折起来完全包裹 Western Blot 膜，去除气泡和皱褶，可剪去边缘部多余 的保鲜膜。用滤纸吸去多余的发光工作液。用胶带将覆盖 Western Blot 膜的保鲜膜固定在暗 盒内，蛋白带面向上。 6. 暗房内压 X 光胶片，分别曝光不同的时间如数秒到数分钟。显影冲洗。 【注意事项】 1. 步骤 1～5 可在日光灯下操作;但发光液曝露于强光下时间过久灵敏度可能略有降低，移 到暗房操作可避免之。戴手套可以避免在膜上留下手印。2. 长时间曝光或蛋白过量，将加深背景并使条带强弱变化失去线性关系。曝光不足则条带 模糊。3. 发光工作液孵育约 2 分钟后膜上的条带发光。强条带发光在暗房中肉眼可见，低丰度蛋 白条带 发光较弱甚至肉眼不可见但可使 X 光胶片曝光。不能简单以肉眼观察判断条带发 光时间。肉眼不可见的荧光实际上可持续数小时并使 X 光胶片感光，因而弱带可曝光 1-10 小 时。如果曝光后条带不佳，可用洗膜缓冲液洗膜，重新孵育二抗，然后重新用 ECL 发光和 曝光。4. 由于超敏发光液极其灵敏，强烈推荐大多数进口抗体起始浓度为抗 1:1000～1:4000， 二抗 1:2000～1:5000。抗体浓度过高将造成高背景或没有条带，导致失败。5. 某些保鲜膜包裹印迹膜时可能会淬灭荧光，应选择高质量保鲜膜。 6. 使用肉眼可见的预染色蛋白 Marker 和荧光-放射自显影曝光标签可精确确定胶片上条带 的位置和大小。7. NaN3能抑制 HRP 活性，回收第二抗体应避免使用 NaN3，如必使用勿超过 0.01%。

说明: Aomabio/奥玛胎牛血清（标准级）产自国内优质血源地，经严格的原料地筛选、原料初筛，原料质量上乘可靠；在先进的生产工艺和严苛的质控标准下，批间差异小、性能稳定、品质优异；同时货源充足，供应稳定。

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说明: 产品特点：1、无毒性：Super Red独特的油性大分子特点使其不能穿透细胞膜进入细胞内，艾姆斯 氏试验结果也表明，该染料的诱变性远远小于EB。2、灵敏度高：适用于各种大小片段的电泳染色，对核酸迁移的影响小于SYBR Green I。3、 稳定性高：适用于使用微波或其它加热方法制备琼脂糖凝胶；室温下在酸或碱缓冲 液中极其稳定，耐光性强。4、信噪比好：样品荧光信号强，背景信号低，荧光强度是EB 的十倍以上，肉眼可观测 到亮度明显比EB 强。5、操作简单：与EB 样，在预制胶和电泳过程中染料不降解；而电泳后染色过程也只 30分钟且无脱色或冲洗，即可直接用紫外凝胶透射仪观察。6、适用范围广：可选择电泳前染色(胶染法)或电泳后染色(泡染法);适用于琼脂 糖凝胶或聚丙烯酰胺凝胶电泳：可用于dsDNA、ssDNA 或 RNA 染色。7、完美兼容：与EB 有相同的光谱特性，无改变滤光片及观察装置：标准的EB 滤光 片或SYBR 滤光片都适用，使用与观察EB相同的普通紫外凝胶透射仪观察即可，在300nm紫光外光附近可得到佳激发。但是Super Red不能被488nm氩离子激光器或相似波长的可见光完全激发，因此不推荐使用此类激发装置的成像系统。对于此类装置，我们推荐您使用Super Green, 它和SYBR Green I的光谱相似，灵敏度相当，但更加稳定。使用方法：1、胶染法(用法同EB) (推荐方法)(1)制胶时加入Super Red核酸染料(例如：每50mL 琼脂糖溶液中加入5μLSuper Red10,000×储液，以此比例类推)。(2)按照常规方法进行电泳。注意事项：此方法染色染料用量相对较少。500 μL 染料大约可以做100块50mL 的胶。由于Super Red具有良好的热稳定性，可以在热的琼脂糖溶液中直接添加，而不要等 待溶液冷却。摇晃振荡或者翻转以保证染料充分混。也可以选择将Super Red加到琼脂糖 粉末和电泳缓冲液中，然后用微波炉或其他常用方式加热：以制备琼脂糖凝胶。 Super Red兼容所有常用的电泳缓冲溶液。如果总是看到条带弥散或分离不理想，建议使用泡染法染色以确认问题是否与染料有关。 如果染色后问题依旧存在，则说明问题与染料无关，请尝试：降低琼脂糖浓度；选用更长的凝胶；延长凝胶时间以保证边缘清晰；改进上样技巧或选择泡染法染色。此方法不适合预制聚丙烯酰胺凝胶，对于聚丙烯酰胺凝胶请使用泡染法。2、泡染法(1)按照常规方法进行电泳。(2)用H₂O 将Super Red 10000×储液释约3,300倍到0.1 M NaCl 中，制成3×染色液。(例 如将15 μL Super Red 10000×储液和5mL 1 M NaCl 加到45 mL H₂O中 ) 。(3)将凝胶小心地放入合适的容器中，如聚丙烯容器中。缓慢加入足量的3×染色液浸没凝胶。室温振荡染色30 min左右，佳染色时间根据凝胶厚度以及琼脂糖浓度不同而略有不同。对于含3.5～10%丙烯酰胺的凝胶，染色时间通常介于30min到1h, 并随丙烯酰胺含量增加而延长。注意事项：用泡染法染色时，染料用量较多。单次使用的染色液可重复使用3次左右。3×Super Red染色液可以大量制备，在室温下避光保存直至用完。特别提醒：如果您使用的是紫外成像仪，请选择Super Red; 如果您使用激光成像仪或希望在可见光下观测，请选择Super Green。在极少数情况下，质粒经某些酶切后的DNA样品会出现拖尾和分辨率降低，此时建议同时尝试两种染色方法以决定哪种方法更加合适。注意事项：为了您的安全和健康，请穿实验服并戴次性手套操作。保存方法：2-8℃避光干燥保存，有效期24个月。