说明: 细胞增殖及毒性检测试剂盒(CCK-8)，增强型【产品编码】210817/210818 【包装规格】 产品组成210818/500T210818/1000TCCK-8 增强型溶液5ml 10ml 说明书 1份 1份 【产品简介】CellCounting Kit-8(简称CCK-8),是种基于WST-8面广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速、高灵敏度检测的试剂盒。CCK-8试剂中含有WST-8(化学名:2-(2-甲氣基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基茉基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2日-四唑单钠盐)是种类似于WTT的化合物，它在电子耦合试剂1-甲氧基-5-甲基吩臻錯硫酸二甲酯(1-Wethoxy PMS)存在条件下,可以被线粒体内的股氢酶还原为具有高度水溶性的橙黄色甲珊产物Formazan(参考图1),生成的Forazan数量与活细胞的数量成正比。因此可利用这特性直接进行细胞增殖和毒性分析,细胞增殖越多越快,则颜色越深:细胞毒性越大，则颜色越浅。 【操作步骤】、制作标准曲线(测定细胞具体数量)制备细胞悬液:细胞计数。K2.接种到96孔板中:按比例(例如:1/2比例)依次用培养基等比释成个细胞浓度梯度，般要做3-5个细胞浓度梯度,每组3-6个重复孔。每孔100L细胞悬液。3.37℃培养箱中培养:细胞接种后贴大约要培养2-4小时,如果不要贴这步可以省去。4.每孔加入10HLCCK-8增强型溶液:由于每孔加入CCK-8量比较少,有可能因试剂沾在孔壁带来误差,建议在加完试剂后轻轻敲击培养板以帮助混,或者直接配制含10%CCK-8的培养基,以换液的形式加入。注意不要在孔中生成气泡,以免彤响吸光摩的检测5.培养箱内孵育定时间后测定450nm吸光度,制作出条以细胞数量为横坐标(X轴)，吸光度为纵坐标(Y轴)的标准曲线。根据此标准曲线可以定出未知品的细胞数量(使用此标准曲线的前提是实验的条件要致,便于确定细胞的接种数量以及加入CCK-8后的培养时间)。便捷程度细胞活性检测1、制备细胞悬液:细胞计数。2.接种到96孔板中:根据合适的铺板细胞数,每孔100HL细胞悬液,可设置3个重复孔3.37℃培养箱中培养:细胞接种后贴壁大约要培养24h小时,如果不要贴壁这步可以省去。也可以根据实验要求的不同,培养相应的时间。4,每孔加入10HL CCK-8增强型溶液由于每孔加入CCK-8量比较少,有可能因试剂沾在孔壁带来误差,建议在加完试剂后轻轻敲击培养板以帮助混。或者直接配制含10%CCK-8的培养基,以换液的形式加入，注意不要在孔中生成气泡,以免影响吸光度的检测。

说明: AMFP胎牛血清是款适用于常规细胞系、传代细胞系及部分原代细胞的培养的优级胎牛血清适用细胞类型:293、293T、CHO、Vero、SF-9等传代细胞Hela、A549、HepG2、MCF-7、HeDG2等肿瘤细胞MRC-5、KMB-17、2BS等二倍体细胞乳腺癌细胞(MDA-MB-231)、鼻咽癌细胞(NPC;SUNE1;CNE1;CNE2;HNE1;HONE1:HNE2;TW03)、结肠癌(CT-26;HCT116;HT-29;HCT8;LoVo;MC38)、胰腺癌(Panco2)、膀胱痘(T24)、肝细胞(Huh7)等肿瘤细胞;B细胞、SP2/0等骨髓瘤细胞、杂交瘤细胞;本血清血源源自非疫区的南美，并在南美加工生产，产品经3级100nm过滤，符合国际知名胎牛血清检测标准。适用于部分原代细胞及其他细胞的培养。原装进口、高质低价。1.内毒素含量≤5EU/ml2.血红蛋白含量≤0.02%(w/v)3.促细胞生产曲线峰值>1.5x106/ml4.细胞倍增时间<16小时5.细胞克降率>85%6.BVD、PI3、IBR检测均为阴性(未检出)

说明: 二甲基亚砜，英文名称DMSO。常用于溶解试剂。二甲基亚砜（DMSO）是种含硫有机化合物，分子式为（CH3)2SO，常温下为无色无臭的透明液体，是种吸湿性的可燃液体。具有高极性、高沸点、热稳定性好、非质子、与水混溶的特性，能溶于乙醇、丙醇、苯和氯仿等大多数有机物，被誉为“万能溶剂”。 二甲基亚砜（DMSO）不能使用PS、PVC、PC材料的容器，而应该使用LDPE、HDPE、PP材料的容器。DMSO属于非质子极性溶剂，常用于化学反应、pcr反应以及在细胞、组织和器官的保存中用作玻璃化低温冷冻防护剂。DMSO用于细胞冷冻培养基内，可以保护细胞免受冰晶引起的机械性损伤。它也可以用于主培养、亚培养、重组异倍体、杂交瘤等系列细胞株，胚胎干细胞（ESC）和造血干细胞的冷冻保藏。另外常常与BSA或FBS混合使用。

说明: ECL Western Blotting Substrate 【保存条件】 4℃避光保存 12 月 【概述】 超敏发光液用于检测直接或间接标记辣根过氧化物酶 HRP 的抗体及其关联的抗原。 用于 HRP 标记抗体的 Western Blot 和 HRP 标记探针的核酸杂交。由于采用了独特的发光底物 系统，SuperStar ECL 超敏发光液是目前灵敏的商业化荧光 ECL 检测试剂（具有极高灵 敏度和高信噪比）；可在日光灯下进行发光操作；发光迅速，荧光可使 X 光胶片感光达 12 小时以上，特别适用于痕量蛋白或核酸检测；可使用更高的抗体释倍数(1:2000～1:10000)， 极其节省抗体。 【特点】  飞克级灵敏度 - 在硝酸纤维素或 PVDF 膜上检测低至飞克量的目标蛋白量  高信号稳定性 - 孵育印迹在关键的 4 小时时间内提供稳定的信号持续时间，在佳条 件下可产生长达 24 小时的光输出  稳定的试剂 - 8 小时工作溶液稳定性; 在 4℃下 1 年的试剂盒稳定性  更经济的抗体用量： 0.2 至 1.0μg/ mL 抗（从 1 mg / mL 原液中 1：1000 至 1：5000 释） 10 至 50 ng / mL 二级抗体（从 1 mg / mL 原液中 1：20,000 至 1：100,000 释） 【操作方法】 1. 执行常规 SDS-PAGE、转膜和 Western Blot 步骤。注意用 HRP 标记 lgG 或用抗-链 亲和素-生物素-HRP 夹法。2. Western Blot 后次洗膜的同时新鲜配制发光工作液：分别取 A:B=1:1 混合（如要 1ml 发光液则取 500ul ECL A 液和 500ul ECL B 液混合），放入干净容器中混合。建议立即使用 工作液，室温放置数小时后仍可使用但灵敏度略有降低。 3. 用镊子取出膜，搭在滤纸上沥干洗液但勿使膜完全干燥。将膜完全浸入发光工作液 (0.125ml 发光工作液/cm2 膜)中，与发光工作液充分接触。室温孵育 2 分钟，准备立即压片 曝光。孵育时间过长不会增加灵敏度，有时还会导致曝光条带异常。发光过程的本质是酶促 反应，使用过少的发光工作液不利反应进行，也会导致膜上条带曝光不均和明显降低灵敏度。 为达节约目的可将 膜剪小但勿降低发光液用量。 4. 用镊子夹起膜，搭在滤纸上沥干发光工作液。但勿洗去发光液。 5. 打 X 光胶片暗盒，在暗盒内表面铺张面积大于膜的保鲜膜。将 Western Blot 膜贴在 保鲜膜上，将保鲜膜折起来完全包裹 Western Blot 膜，去除气泡和皱褶，可剪去边缘部多余 的保鲜膜。用滤纸吸去多余的发光工作液。用胶带将覆盖 Western Blot 膜的保鲜膜固定在暗 盒内，蛋白带面向上。 6. 暗房内压 X 光胶片，分别曝光不同的时间如数秒到数分钟。显影冲洗。 【注意事项】 1. 步骤 1～5 可在日光灯下操作;但发光液曝露于强光下时间过久灵敏度可能略有降低，移 到暗房操作可避免之。戴手套可以避免在膜上留下手印。2. 长时间曝光或蛋白过量，将加深背景并使条带强弱变化失去线性关系。曝光不足则条带 模糊。3. 发光工作液孵育约 2 分钟后膜上的条带发光。强条带发光在暗房中肉眼可见，低丰度蛋 白条带 发光较弱甚至肉眼不可见但可使 X 光胶片曝光。不能简单以肉眼观察判断条带发 光时间。肉眼不可见的荧光实际上可持续数小时并使 X 光胶片感光，因而弱带可曝光 1-10 小 时。如果曝光后条带不佳，可用洗膜缓冲液洗膜，重新孵育二抗，然后重新用 ECL 发光和 曝光。4. 由于超敏发光液极其灵敏，强烈推荐大多数进口抗体起始浓度为抗 1:1000～1:4000， 二抗 1:2000～1:5000。抗体浓度过高将造成高背景或没有条带，导致失败。5. 某些保鲜膜包裹印迹膜时可能会淬灭荧光，应选择高质量保鲜膜。 6. 使用肉眼可见的预染色蛋白 Marker 和荧光-放射自显影曝光标签可精确确定胶片上条带 的位置和大小。7. NaN3能抑制 HRP 活性，回收第二抗体应避免使用 NaN3，如必使用勿超过 0.01%。